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反相色谱(RPC)是指利用非极性的反相介质为固定相，极性有机溶1剂的水溶液为流动相，根据溶质极性(疏水性)的差别进行溶质分离与纯化的洗脱色谱法。这样就造成样品在进行色谱分离的时候，会吸附或者键合在这部分硅羟基上，导致色谱峰拖尾。与HIC一样，RPC中溶质也通过疏水性相互作用分配于固定相表面，但是，RPC固定相表面完全被非极性基团所覆盖，表现出强烈的疏水性。因此，必须用极性有机溶1剂或其水溶液进行溶质的洗脱分离。溶质在反相介质上的分配系数取决于溶质的疏水性，一般疏水性越大，分配系数越大。当固定相一定时，可以通过调节流动相的组成调整溶质的分配系数。RPC主要应用于相对分子质量低于5000，特别是1000以下的非极性小分子物质的分析和纯化，也可以用于蛋白质等生物大分子的分析和纯化。由于反相介质表面为强烈疏水性，并且流动相为低极性的有机溶1剂，生物活性大分子在RPC分离过程中容易变性失活，所以，以回收生物活性蛋白质为目的时，应注意选用适宜的反相介质。

一般来说，涂有极性固定相和较厚涂层的色谱柱老化时间长，而弱极性固定相和较薄涂层的色谱柱所需时间较短。色谱又称色层法或层析法，是一种物理化学分析方法，它利用不同溶质（样品）与固定相和流动相之间的作用力（分配、吸附、离子交换等）的差别，当两相做相对移动时，各溶质在两相间进行多次平衡，使各溶质达到相互分离。而PLOT色谱柱的老化方法有各不相同。 PLOT柱的老化步骤:HLZ Pora 系列 250℃， 8小时以上Molesieve分子筛 300℃ 12小时Alumina氧化铝 200℃ 8小时以上由于水在氧化铝和分子筛PLOT柱中的不可逆吸附，使得这两种色谱柱容易发生保留行为漂移。当柱子分离过含有高水分样品后，需要将色谱柱重新老化，以除去固定相中吸附的水分。设置确认载气流速对于 毛细管色谱柱，载气的种类高纯度氮气或氢气。载气的纯度大于99.995%，而其中的含氧量越少越好。如果您使用的是 毛细管色谱柱，那么依照载气的平均线速度（cm/sec）,而不是利用载气流量（ml/min）来对载气做出评价。因为柱效的计算采用的是载气的平均线速度。推荐平均线速度值：氮气：10-12cm/sec 氢气：20-25cm/sec载气杂质过滤器在载气的管线中加入气体过滤装置不仅可以延长色谱柱寿命，而且很大程度的降低了背景噪音。建议安装一个高容量脱氧管和一个载气净化器。使用ECD系统时，能在其辅助气路中也安装一个脱氧管。

色谱法，又称层析法。近几十年色谱作为一种强大的分离技术与MS等检测手段的联用得到了极大的发展，GC－MS，HPLC－MS等在检测，食品安全分析等方面应用广泛，是成熟的分析方法。根据其分离原理，有吸附色谱、分配色谱、离子交换色谱与排阻色谱等方法。吸附色谱是利用吸附剂对被分离物质的吸附能力不同，用溶剂或气体洗脱，以使组分分离。常用的吸附剂有氧化铝、硅胶、聚酰胺等有吸附活性的物质。分配色谱是利用溶液中被分离物质在两相中分配系数不同，以使组分分离。其中一相为液体，涂布或使之键合在固体载体上，称固定相；另一相为液体或气体，称流动相。常用的载体有硅胶、硅藻土、硅镁型吸附剂与纤维素粉等。离子交换色谱是利用被分离物质在离子交换树脂上的离子交换势不同而使组分分离。常用的有不同强度的阳、阴离子交换树脂，流动相一般为水或含有的缓冲液。排阻色谱又称凝胶色谱或凝胶渗透色谱，是利用被分离物质分子量大小的不同和在填料上渗透程度的不同，以使组分分离。常用的填料有分子筛、葡聚糖凝胶、微孔聚合物、微孔硅胶或玻璃珠等，可根据载体和试样的性质，选用水或为流动相。

在运作的过程中液相色谱仪的分析速度是非常快的，载液的流速也非常快，所以它能够很快的得出结果，有的分析样品可以在15到半个小时内得出结果，有的只需要五分钟就够了，这是因为不同液体的成分不同，所以得出结果的速度也完全不一样，大部分的液体时间都低于一个小时，从中我们可以看出液相色谱仪的工作效率。或拆下进出单向阀放在10%的液内超声清洗30~60min，若仍不解决问题则要更换单元向阀。现在的液相色谱仪有着的特点，首先就体现在它的分离效果非常好，大家可以自由的选择固体流动或者是液体流动，根据你所选择的效果能够达到Z佳的分离效果，同时这要比工业精馏塔和色相谱的分析更加，测量出来的结果一般是不会有任何错误的，这是液相色谱仪非常厉害的一点。后，液相色谱仪的灵敏度也是非常高的，它可以用紫外检测器进行检测，结果的度非常高。由此我们可以看出，液相色谱仪的优点是非常多的，正是因为它的优点很多，人们才愿意去使用它，在使用了液相色谱仪之后大家获得了极大的方便，相信以后它会变得更加普及的。